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摘要:探討五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠負(fù)性情緒及行為的影響。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為3組，分別為大平臺(tái)對(duì)照 組，小平臺(tái)剝奪組和五味子木脂素組。各組動(dòng)物經(jīng)水平臺(tái)睡眠剝奪裝置剝奪睡眠3d后進(jìn)行高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫 游泳實(shí)驗(yàn)及負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，記錄各項(xiàng)指標(biāo)。研究結(jié)果顯示，與大平臺(tái)對(duì)照組相比,小平臺(tái)剝奪組大鼠的進(jìn)入開臂時(shí)間 及次數(shù)的比例減少，強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng)和大鼠游泳至力竭時(shí)間減少。與小平臺(tái)剝奪組相比,五味子木脂素組大鼠 進(jìn)入開臂時(shí)間和次數(shù)比例延長(zhǎng)，大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間減少和游泳至力竭時(shí)間延長(zhǎng)。五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪所致 的焦慮、抑郁及疲勞等具有明顯的保護(hù)作用。
關(guān)鍵詞:五味子木脂素；睡眠剝奪;抗焦慮;抗抑郁;抗疲勞
五味子為木蘭科植物五味子 Schisandra chinensis (Turcz) Baill的干燥成熟果實(shí)，民間多以煎煮口服、泡 酒飲用、磨粉溫水口服為用，具有安神定志的功效。社 會(huì)經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展的今天，由于生活及工作的需求和壓 力，越來越多的人處于潛在的睡眠剝奪狀態(tài)之中，長(zhǎng) 時(shí)間的睡眠剝奪會(huì)造成曰間活動(dòng)功能下降[1-3]。研究顯 示，近一半的失眠患者都會(huì)伴有一種或幾種精神障礙， 其中焦慮障礙占大約24 %,抑郁障礙占大約23 %[4], 包括由于失眠所導(dǎo)致的疲勞、體力下降等，這些都會(huì) 對(duì)患者的身心健康及生活質(zhì)量造成不可預(yù)估的巨大 影響。因此，開發(fā)研究治療失眠的藥物或保健食品，除 關(guān)注夜間睡眠質(zhì)量以外，還應(yīng)關(guān)注對(duì)焦慮、抑郁等負(fù) 性情緒和抗疲勞能力等曰間功能的改善作用。以往實(shí) 驗(yàn)研究表明，五味子木脂素可以減少其自主活動(dòng)次 數(shù)，延長(zhǎng)戊巴bi妥鈉所致動(dòng)物的睡眠時(shí)間，延長(zhǎng)自由 活動(dòng)動(dòng)物等總睡眠時(shí)間，表現(xiàn)為鎮(zhèn)靜催眠作用[5-\同 時(shí)，亦有研究發(fā)現(xiàn)，五味子木脂素對(duì)束縛應(yīng)激引起的 焦慮癥及壓力引起的抑郁癥、衰老動(dòng)物的疲勞能力下 降，均具有良好的抑制作用[8-9]。但五味子木脂素對(duì)于 睡眠剝奪動(dòng)物所致的負(fù)性情緒,易于疲勞等方面影響 的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)采用小平臺(tái)睡眠剝奪裝置對(duì)大鼠 進(jìn)行睡眠剝奪，觀察五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠的 焦慮和抑郁等負(fù)性情緒，以及疲勞程度的影響，為把 五味子開發(fā)成具有抵制睡眠剝奪所致的曰間功能下 降的藥物及保健食品提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。
1材料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SD大鼠，雄性，體重220g~260g,無(wú)特定病原 (specific pathogen free, SPF)級(jí)，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 藥物評(píng)價(jià)中心實(shí)驗(yàn)室提供，動(dòng)物許可證號(hào):SCXK (黑） 2018-004。
1.2試劑及藥物
羧甲基纖維素鈉：天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中 心，生產(chǎn)批號(hào):20180312;AB-8大孔樹脂：安徽三星樹 脂科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào):20170504;五味子木脂素 凍干粉(總木脂素含量不小于56 % :黑龍江中醫(yī)藥大 學(xué)藥學(xué)院中藥藥理教研室；五味子藥材：遼寧，批號(hào)： 2016111。
1.2.1五味子木脂素凍干粉制備及配置方法
藥材浸泡12 h后經(jīng)8倍量95 %乙醇回流2 h,重 復(fù)3次。提取液濃縮后經(jīng)AB-8大孔樹脂柱吸附，乙醇 液梯度洗脫，收集80 %乙醇洗脫液。濃縮成浸膏，制成 凍干粉,經(jīng)紫外分光光度計(jì)在254 nm波長(zhǎng)下測(cè)定凍干 粉中總木脂素含量不小于56 %。臨用前將五味子木脂 素凍干粉與1 %羧甲基纖維素鈉溶液配制成濃度為 13.44 mg/mL的五味子木脂素混懸液。
1.3儀器
負(fù)重游泳裝置（直徑50 cm,高60 cm 圓捕、強(qiáng)迫游泳裝置（直徑30 cm,高60 cm圓桶）：市 售；高架十字迷宮：上海欣軟信息科技有限公司；
2方法
2.1實(shí)驗(yàn)分組
將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)環(huán)境[溫度（24±2 °C,濕 度<55±15 %,12h明暗交替（光照:7:00~19:00,黑暗： 19:00?7:00 ],動(dòng)物自由獲取食物和水，一周后隨機(jī)分 為3組，每組8只,分別為大平臺(tái)對(duì)照組，小平臺(tái)剝奪 組和五味子木脂素組。
2.2睡眠剝奪及給藥
大平臺(tái)對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于大平臺(tái)對(duì)照裝置中， 小平臺(tái)剝奪組和五味子木脂素組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別置于 小平臺(tái)睡眠剝奪裝置中，連續(xù)3 d,自由飲食和飲水。睡 眠剝奪期間，大平臺(tái)對(duì)照組和小平臺(tái)剝奪組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 分別經(jīng)灌胃途徑每曰早晚8點(diǎn)給予1 %羧甲基纖維素 鈉溶液（1.0mL/200g體重，五味子木脂素組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 經(jīng)灌胃途徑每曰早晚8點(diǎn)給予五味子木脂素混懸液 (13.44 mg/mL, 1.0 mL/200 g 體重，連續(xù)給藥 3 d。
2.3 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)
第4天早8點(diǎn)，將各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別從小平臺(tái)剝 奪裝置和大平臺(tái)對(duì)照裝置中取出，用吹風(fēng)機(jī)將其毛吹 干，再放于弱光、四周有黑色簾子的高架十字迷宮上。 大鼠背對(duì)實(shí)驗(yàn)者，頭朝向開臂端放置，采集5 min視 頻。每只大鼠做完實(shí)驗(yàn)后，高架十字迷宮開臂和閉臂 都必須先用低濃度酒精擦完，再用高濃度酒精擦，等 酒精揮發(fā)后，按照上述步驟，再繼續(xù)放第2只大鼠，直 至所有動(dòng)物都做完實(shí)驗(yàn)。觀看視頻，記錄動(dòng)物進(jìn)入開 臂次數(shù)和滯留時(shí)間，閉臂次數(shù)及滯留時(shí)間，計(jì)算開臂 次數(shù)比例和滯留時(shí)間比例。
開臂次數(shù)比例=開臂次數(shù)/(開臂次數(shù)+閉臂次魏
開臂時(shí)間比例=開臂滯留時(shí)間/(開臂滯留時(shí)間+閉 臂滯留時(shí)間）
2.4強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)
睡眠剝奪前，先將各組大鼠置于水深45 cm,直徑 30 cm的圓桶中，水溫維持在(28±2 °C,進(jìn)行15 min的 強(qiáng)迫游泳訓(xùn)練，然后將各組動(dòng)物分別置于大平臺(tái)對(duì)照 裝置和小平臺(tái)睡眠剝奪裝置中，連續(xù)3 d后,從平臺(tái)裝 置中取出各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,再次將大鼠置于圓桶中游泳 5 min,記錄5 min內(nèi)累加靜止不動(dòng)時(shí)間（即大鼠除了為 避免沒入水中而向上的運(yùn)動(dòng)外而無(wú)其它行為的時(shí) 間）。
2.5負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)
第4天早8點(diǎn)，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別從小平臺(tái)剝奪 裝置和大平臺(tái)對(duì)照裝置中取出，用吹風(fēng)機(jī)將其毛吹 干。然后在大鼠尾部負(fù)重，重量為大鼠體重5%的鉛 塊。負(fù)重后的大鼠，立即放入水深45 cm,直徑50 cm 的圓桶中，水溫維持在(28±2 °C,進(jìn)行負(fù)重強(qiáng)迫游泳實(shí) 驗(yàn)。記錄大鼠力竭時(shí)間（即從大鼠放入圓桶中開始計(jì) 時(shí)，直至大鼠沉入桶底超過10 s沒有再次游上水面呼 吸的持續(xù)時(shí)間）。
2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果采用 x±S.E.M.表示，單因素方差分析方法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理, LSD法進(jìn)行兩兩比較，<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3結(jié)果
3.1五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠焦慮樣行為的影響 五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠進(jìn)入開臂次數(shù)及 時(shí)間比例的影響結(jié)果見圖1。
與大平臺(tái)對(duì)照組相比，小平臺(tái)剝奪組大鼠的進(jìn)入 開臂時(shí)間比例和開臂次數(shù)比例明顯減少，具有顯著性 差異^<0.05)。與小平臺(tái)剝奪組相比，五味子木脂素組 大鼠的進(jìn)入開臂時(shí)間比例和開臂次數(shù)比例明顯增加, 具有極顯著性差異(p<0.01)。
3.2五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠抑郁樣行為的 影響
五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠不動(dòng)時(shí)間的影響
與大平臺(tái)對(duì)照組相比，小平臺(tái)剝奪組大鼠的強(qiáng)迫 游泳不動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，有極顯著性差異^<0.01)。與 小平臺(tái)剝奪組相比，五味子木脂素組大鼠的強(qiáng)迫游泳 不動(dòng)時(shí)間明顯減少，有極顯著性差異^<0.01)。
3.3五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠疲勞程度的影響 五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠力竭時(shí)間的影響
與大平臺(tái)對(duì)照組相比，小平臺(tái)剝奪組大鼠的游泳 至力竭時(shí)間明顯減少，有極顯著性差異^<0.01。與小 平臺(tái)剝奪組相比,五味子木脂素組大鼠的游泳至力竭 時(shí)間明顯延長(zhǎng)，有極顯著性差異^<0.01。
4結(jié)論與討論
本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，五味子木脂素能增加睡眠剝奪 大鼠進(jìn)入開臂時(shí)間和次數(shù)的比例，減少大鼠強(qiáng)迫游泳 不動(dòng)時(shí)間，延長(zhǎng)大鼠游泳至力竭時(shí)間，具有明顯對(duì)抗 睡眠剝奪所致的焦慮，抑郁和疲勞的作用。高架十字 迷宮利用大鼠對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開 臂的恐懼心理，形成的矛盾沖突從而考察動(dòng)物焦慮狀 態(tài),動(dòng)物進(jìn)入開放臂次數(shù)比例和進(jìn)入開放臂停留時(shí)間 比例與焦慮程度直接相關(guān)[10],是抗焦慮研究中應(yīng)用 廣泛的模型之一。睡眠剝奪后的大鼠進(jìn)入開臂時(shí)間及 次數(shù)比例明顯減少、表現(xiàn)出明顯的焦慮樣狀態(tài)。強(qiáng)迫 游泳實(shí)驗(yàn)可以很好的模擬人類抑郁情緒，被廣泛用于 抗抑郁藥的篩選和評(píng)價(jià)[11]。其不動(dòng)的時(shí)間可作為評(píng)價(jià) 抑郁行為的指標(biāo)，動(dòng)物不動(dòng)時(shí)間增加即出現(xiàn)抑郁傾 向。若藥物可減少動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間，即提示該藥物可 能具有抗抑郁活性1]。睡眠剝奪后的大鼠強(qiáng)迫游泳不 動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)，表現(xiàn)出明顯的抑郁樣狀態(tài)。疲勞主 要表現(xiàn)為體力和運(yùn)動(dòng)耐力下降,負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)裝置簡(jiǎn) 單，實(shí)驗(yàn)結(jié)果能直接ke觀地反映動(dòng)物的體能，是為 常用的運(yùn)動(dòng)耐力測(cè)定方法睡眠剝奪后的大鼠游泳 至力竭時(shí)間明顯減少，表現(xiàn)為易于疲勞。結(jié)合3個(gè)行 為指標(biāo)綜合探討了五味子木脂素對(duì)睡眠剝奪大鼠曰 間行為的影響，為五味子改善睡眠剝奪大鼠的曰間功 能提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。
